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Test immunologique qualitatif pour la détermination des résidus d'antibiotiques tétracyclines dans des échantillons de lait suivi d'une HPLC quantitative améliorée

Oct 11, 2023

Rapports scientifiques volume 12, Numéro d'article : 14502 (2022) Citer cet article

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Les contaminants environnementaux sont l’un des nombreux problèmes qui nuisent aux personnes et à la faune. Un exemple de contaminants émergents actuels sont les résidus d’antibiotiques qui peuvent être présents dans l’eau et les aliments. Bien que les antibiotiques soient destinés à traiter ou à prévenir les infections humaines et animales, ils ont également été utilisés comme compléments alimentaires pour animaux en raison de leur capacité à favoriser la croissance et l’efficacité alimentaire. Cette utilisation excessive d'antibactériens a entraîné l'accumulation de résidus d'antibiotiques dans les produits alimentaires qui sont finalement consommés par l'homme. L'exposition continue et inutile de l'homme aux antibiotiques par le biais de la nourriture ou du lait direct des animaux, ou indirectement par le biais des plantes ou du sol, peut augmenter le risque d'émergence de bactéries multirésistantes aux médicaments et, par conséquent, nuire à la santé humaine. De nouvelles réglementations ont été imposées concernant l'utilisation des antibiotiques. En raison du manque de données concernant les conditions de résidus d'antibiotiques dans différents types d'aliments destinés à la consommation humaine en Arabie Saoudite, cette étude a proposé une méthode chromatographique optimisée (HPLC-DAD) suivie d'une approche de dosage immunologique pour détecter spécifiquement les antibiotiques tétracyclines dans les échantillons de lait animal. La méthode a été réalisée à l'aide d'une colonne RP-C18 avec une phase mobile constituée de KH2PO4 0,01 M : acétonitrile : méthanol (70:20:10, v/v/v) ajustée à pH 4. Des améliorations ont été observées dans la méthode en termes de résolution et de sensibilité. La méthode de précipitation des protéines utilisée pour l'extraction a démontré des pourcentages de récupération élevés de 85 à 101 %. La méthode a été validée selon les directives de la Conférence internationale pour l'harmonisation (ICH). Il ressort clairement de ces résultats que la présence de résidus d'antibiotiques tétracyclines et oxytétracyclines dans les produits laitiers en provenance du marché saoudien est inférieure aux limites maximales résiduelles (LMR).

La pollution de l’environnement est un défi auquel le monde est confronté au cours du siècle actuel. Ce problème est défini comme « la contamination des composants physiques et biologiques du système terre/atmosphère à un point tel que les processus environnementaux normaux en sont affectés »1. Les substances ou l’énergie présentes au-dessus des niveaux naturels sont considérées comme des polluants1. Les résidus d'antibiotiques sont une forme de contaminant environnemental qui peut être présent dans les animaux, les plantes ou le sol et peut favoriser le développement de microbes résistants. La résistance microbienne résultant d'une utilisation et d'une exposition inutiles aux antibiotiques est définie comme des changements dans les mécanismes de résistance bactérienne ou le développement de nouveaux mécanismes en réponse à des antibiotiques spécifiques, à une classe d'antibiotiques ou à plusieurs types d'antibiotiques contre des agents pathogènes dits multirésistants ( MDR)2. Pour tenter de préserver l’activité antimicrobienne, les autorités réglementaires ont restreint le processus de prescription d’antibiotiques. Cependant, les antibiotiques sont également utilisés comme conservateurs alimentaires, pour favoriser la croissance et améliorer la productivité du bétail et de la volaille, en plus de leur utilisation en médecine vétérinaire3,4,5. Des recherches antérieures ont démontré que l'utilisation de niveaux élevés d'antibiotiques pour augmenter la productivité animale est associée à la présence de résidus d'antibiotiques dans les aliments d'origine animale6,7,8. L'exposition continue de l'homme à des résidus d'antibiotiques peut être nocive pour l'homme, augmentant le risque de développer des réactions allergiques, perturbant la flore intestinale normale, ou pouvant transférer des bactéries résistantes aux antibiotiques (ARA) ou des gènes de résistance aux antibiotiques (ARG) des animaux aux humains5.

La tétracycline (TTR), la chlortétracycline (CTC) et l'oxytétracycline (OXY) comptent parmi les antibiotiques les plus couramment utilisés en élevage en raison de leur efficacité et de leur faible coût9,10. De nombreuses études ont démontré l’utilisation inappropriée de ces antibiotiques dans le monde et les conséquences d’une telle pratique6,11. Par exemple, il existe une utilisation incontrôlée d’antibiotiques dans les aliments composés pour animaux ou comme conservateurs dans l’industrie alimentaire12,13. De plus, les antibiotiques sont souvent administrés aux animaux directement avant l'abattage ou introduits dans l'artère carotide immédiatement après l'abattage pour augmenter la durée de conservation de la viande fraîche12. À terme, les concentrations résiduelles d'antibiotiques peuvent dépasser les limites résiduelles maximales (LMR) autorisées par l'Union européenne (UE) et l'Organisation mondiale de la santé (OMS).

 98.00%), chlortetracycline (> 95.00%) and the internal standard ornidazole (ORZ, > 99.00%) were purchased from Haoyuan ChemExpress Co., Ltd. (Shanghai, China). Potassium dihydrogen orthophosphate anhydrous (KH2PO4) was obtained from Loba Chemie Pvt. Ltd. (Mumbai, India). Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate (Na2EDTA) was obtained from Sigma–Aldrich Chemie Gmbh (Steinheim, Germany). Orthophosphoric acid (H3PO4) was obtained from Avonchem Ltd. (Cheshire, UK). The acetonitrile and methanol solvents in the mobile phase were of UHPLC and HPLC grade. Deionized water was used in all experiments. Milk samples were purchased from multiple local markets and farms in the city of Riyadh. Tetracycline Rapid Immunoassay test kits were obtained from Meizheng Biotech Group, a PerkinElmer company (Beijing, China). The HPLC system (Waters, Milford, MA, USA) consisted of a Waters 1525 binary HPLC pump, a Waters 2998 photodiode array detector, and a Waters 2707 autosampler. The data were acquired and processed using Waters Empower 3 software./p> 0.9998 for each drug, showing that the method is linear in the specified range. The concentrations used for the calibration curve were 0.09, 0.3, 0.5, 0.7, and 1 µg/mL./p>